產(chǎn)品簡介：
本產(chǎn)品是專用于染料法（SYBR GreenⅠ）實(shí)時(shí)熒光定量PCR 的預(yù)混體系。2×濃度，操作簡單方便；新一代的高效熱啟動(dòng)酶，針對qPCR優(yōu)化的PCR buffer與增強(qiáng)劑，使本產(chǎn)品特異性強(qiáng)，靈敏度高，在寬廣的模板濃度范圍可以得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可信度高。
適用機(jī)型：
ABI Prism 7500, ABI Prism 7500 Fast, ABI QuantStudio Dx/3/5, ABI QuantStudio 6/7/12K Flex, ABI ViiA 7, Stratagene Mx3000P/Mx3005P/Mx4000
三步法熒光定量PCR
步驟 | 溫度 | 時(shí)間 |
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預(yù)變性 | 95℃ | 30 s |
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變性 | 95℃ | 10 s | 35-40 個(gè)循環(huán) |
退火 | 56-64℃ 1） | 10 s |
延伸 | 72℃ | 30 s 2） |
融解曲線分析 3） |
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| 95℃ | 15 s |
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| 60℃ | 1 min |
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| 95℃ | 15 s |
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| 60℃ | 15 s |
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注意：
1）無法得到理想的擴(kuò)增效率時(shí)，適當(dāng)降低退火溫度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，提高退火溫度。
2）對于300bp以內(nèi)的片段，延伸時(shí)間30s即可，200bp以內(nèi)的片段，延伸時(shí)間20s即可。
3）本說明是以ABI 7500熒光定量PCR儀為參照設(shè)定，融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定。
