產(chǎn)品介紹
本產(chǎn)品以總RNA或miRNA為模板,先通過(guò)Poly(A)聚合酶在miRNA的3`端加多聚A尾,隨后使用Universal Oligo(dT) Primer進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),最終生成miRNA對(duì)應(yīng)的cDNA第一鏈。
產(chǎn)品特點(diǎn)
操作簡(jiǎn)單:在一管中即可同時(shí)完成加尾和逆轉(zhuǎn)錄。
特異性強(qiáng):POLY(A)聚合酶特異性識(shí)別單鏈miRNA,最大限度降低miRNA前體的逆轉(zhuǎn)錄;逆轉(zhuǎn)錄引物設(shè)計(jì)為莖環(huán)結(jié)構(gòu),減少了PCR時(shí)的非特異性擴(kuò)增。
逆轉(zhuǎn)錄效率高:逆轉(zhuǎn)錄酶無(wú)RNase H活性,具有更高的逆轉(zhuǎn)錄效率和靈敏度。
產(chǎn)品應(yīng)用
以總RNA或miRNA為模板,進(jìn)行加A尾法逆轉(zhuǎn)錄,產(chǎn)物用于RT-PCR、熒光定量PCR。
實(shí)驗(yàn)案例
1、一步完成加尾和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

2、優(yōu)異的逆轉(zhuǎn)錄特異性
以水稻miRNA為模板,使用本產(chǎn)品與某T公司和某V公司同類產(chǎn)品進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,得到的cDNA進(jìn)行熒光定量檢測(cè)osa-miR156a??梢钥吹?,使用本產(chǎn)品得到的融解曲線為單峰,同類產(chǎn)品得到的融解曲線為雙峰。
3、優(yōu)異的靈敏度和穩(wěn)定性
使用本產(chǎn)品反轉(zhuǎn)錄小鼠肝miRNA,之后用熒光定量檢測(cè)hsa-miR-30a-3p。結(jié)果顯示,反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的靈敏度和穩(wěn)定性均良好。
擴(kuò)增曲線 | 融解曲線
|

| 
|
小鼠肝miRNA濃度:226ng/uL,取1 uL反轉(zhuǎn)錄(反轉(zhuǎn)錄體系:20 μL),將cDNA原液分別稀釋101-105,取2 μL 進(jìn)行qPCR,q-PCR試劑:2×HQ SYBR qPCR Mix (Without ROX)熒光定量試劑(ZF501)。