本產(chǎn)品為預(yù)混的含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、反應(yīng)緩沖液、mg2+、PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑以及穩(wěn)定劑等成分的2×PCR體系,使用時(shí)只需加入DNA模板和引物,并用水補(bǔ)足體積。本產(chǎn)品具有快速簡單、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn),可最大限度地減少人為誤差、節(jié)約PCR實(shí)驗(yàn)操作時(shí)間、降低污染幾率。不含有染料,在PCR反應(yīng)完成后,產(chǎn)物需添加上樣緩沖液即可直接進(jìn)行電泳,也可純化回收后用于酶切、克隆、測序等后續(xù)反應(yīng)。選用的Pfu DNA聚合酶具有比Taq酶更高的耐熱活性,98℃時(shí)1小時(shí)后可保留90%以上的酶活性。具有5’-3’ DNA聚合酶活性和3’-5’外切核酸酶活性(校正活性),pfu酶是目前已發(fā)現(xiàn)的所有耐高溫DNA Polymerase中出錯(cuò)率最低的。在PCR反應(yīng)中,pfu DNA Polymerase延伸速度為0.5-1 kb/分鐘,產(chǎn)物3’端為平端,可用平端載體克隆。
■ 適用范圍
1.高保真基因克?。喝缁虮磉_(dá)克隆、基因定點(diǎn)突變、細(xì)胞內(nèi)基因點(diǎn)突變分析(SNP)和平末端補(bǔ)平等。
2.復(fù)雜DNA模板(如GC含量高,二級(jí)結(jié)構(gòu))的擴(kuò)增。
3.PCR產(chǎn)物3 ’端附?jīng)]有突出的“ A ”堿基,純化后可用于平端克 ??;若用于T/A克隆,需加A后方可使用。
4.大量高保真需求的基因克?。喝鏲DNA文庫的建立等。
■ 質(zhì)量控制
經(jīng)檢測無外源核酸酶活性;PCR方法檢測無宿主殘余 DNA ;能有效地?cái)U(kuò)增人基因中的單拷貝基因;室溫存放一周,無明顯活性改變。