產(chǎn)品簡介:
本產(chǎn)品是專用于染料法(SYBR GreenⅠ)實時熒光定量PCR 的預(yù)混體系。2×濃度,操作簡單方便;新一代的高效熱啟動酶,針對qPCR優(yōu)化的PCR buffer與增強(qiáng)劑,使本產(chǎn)品特異性強(qiáng),靈敏度高,在寬廣的模板濃度范圍可以得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線,定量準(zhǔn)確,重復(fù)性好,可信度高。
適用機(jī)型:
ABI Prism 7000/7300/7700/7900, ABI Step One, ABI Step One Plus, ABI 7900HT, ABI 7900HT Fast
三步法熒光定量PCR
步驟 | 溫度 | 時間 |
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預(yù)變性 | 95℃ | 30 s |
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變性 | 95℃ | 10 s | 35-40 個循環(huán) |
退火 | 56-64℃ 1) | 10 s |
延伸 | 72℃ | 30 s 2) |
融解曲線分析 3) |
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| 95℃ | 15 s |
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| 60℃ | 1 min |
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| 95℃ | 15 s |
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| 60℃ | 15 s |
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注意:
1)無法得到理想的擴(kuò)增效率時,適當(dāng)降低退火溫度;發(fā)生非特異性反應(yīng)時,提高退火溫度。
2)對于300bp以內(nèi)的片段,延伸時間30s即可,200bp以內(nèi)的片段,延伸時間20s即可。
3)本說明是以ABI 7500熒光定量PCR儀為參照設(shè)定,融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定。