■ 產(chǎn)品介紹
GS115是畢赤酵母菌株,屬于真核細(xì)胞。一般的針對原核生物的抗生素例如卡那和氨芐對酵母是無效的,因此為了防止大腸桿菌等原核生物對酵母培養(yǎng)菌株污染,往往會在培養(yǎng)基中加入一些氨芐和卡那霉素的抗生素,來抑制細(xì)菌菌的污染和生長。GS115畢赤酵母自身表型為Mut+,但是GS115轉(zhuǎn)化株既能夠產(chǎn)生出Mut+菌株,也能夠產(chǎn)生出Muts菌株。目的蛋白在這兩種轉(zhuǎn)化株的表達(dá)水平可能是不同的,并且具有不可預(yù)測性,所以只有通過實(shí)驗(yàn)才能得到最好的酵母表達(dá)方案。 畢赤酵母適宜的生長溫度是28至30度,溫度超過32度對蛋白的表達(dá)是有害的,并可能導(dǎo)致細(xì)胞的死亡。GS115畢赤酵母是是組氨酸缺陷型(His4基因型),如果表達(dá)載體上攜帶有組氨酸基因,可補(bǔ)償宿主菌的組氨酸缺陷,因此可以在不含組氨酸的培養(yǎng)基上篩選轉(zhuǎn)化子。這些受體菌自發(fā)突變?yōu)榻M氨酸野生型的概率一般低于10-8。GS115畢赤酵母可以在YPD培養(yǎng)基中生長,或者在補(bǔ)充有組氨酸的minimal media中生長,但是無法在單獨(dú)的minimal media培養(yǎng)基中生長。 巴斯德畢赤酵母,是甲醇營養(yǎng)型酵母中的一類能夠利用甲醇作為唯一碳源和能源的酵母菌。與其它酵母一樣,在無性生長期主要以單倍體形式存在,當(dāng)環(huán)境營養(yǎng)限制時(shí),常誘導(dǎo)2個(gè)生理類型不同的接合型單倍體細(xì)胞交配,融合成雙倍體。巴斯德畢赤酵母的另一個(gè)生物學(xué)特點(diǎn)是,甲醇代謝所需的醇氧化酶被分選到過氧化物酶體中,形成區(qū)域化。以葡萄糖作碳源時(shí),菌體中只有1個(gè)或很少幾個(gè)小的過氧化物酶體,而以甲醇作碳源時(shí),過氧化物酶體幾乎占到整個(gè)細(xì)胞體積的80%,AOX增至細(xì)胞總蛋白的35%-40%。因此,當(dāng)在AOX基因前利用同源重組方式插入外源蛋白基因時(shí),可獲得大量表達(dá)。同時(shí),根據(jù)甲醇酵母這種可以形成過氧化物酶體的特性,既可利用該系統(tǒng)表達(dá)一些毒性蛋白和易被降解的酶類,也可用以研究細(xì)胞特異區(qū)域化的生物發(fā)生及其機(jī)制和功能,為高等動物類似的研究提供啟示。 |
基因型: | His4(基因型),Mut+(表型) |
■ 基本信息
培養(yǎng)基: | YPD/YPDA |
菌株類別: | 酵母菌 |
培養(yǎng)條件: | 28℃,有氧,YPD/YPDA |
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化: | 化轉(zhuǎn)/電轉(zhuǎn) |
保存方式: | 收到后保種,30%甘油,-80℃ |
基本應(yīng)用: | 用于蛋白表達(dá) |
■ 使用方法
收到菌液及時(shí)四區(qū)劃線活化,挑取單克隆在YPD中培養(yǎng)到生長對數(shù)中后期加入終濃度30%無菌甘油保種,分裝置于-80℃保存,避免反復(fù)化凍。建議超凈臺內(nèi)劃線涂板,避免雜菌污染。
■ 注意事項(xiàng)
1. 酵母菌在YPD培養(yǎng)基上會變粉,是正?,F(xiàn)象,可以由此特性鑒別是否為酵母菌。
2. 酵母菌種化凍1-2次活性下降,不建議直接長期保存。
3. 活化保種的種管建議分裝保存,反復(fù)凍融菌株活力下降。
4. 本產(chǎn)品僅可用于實(shí)驗(yàn)室研究,不能用于動物,人體以及作為食品添加劑等用途。
5. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。