PichiaPink Strain4是畢赤酵母Pink菌株，屬于真核細(xì)胞。一般的針對(duì)原核生物的抗生素例如卡那和氨芐對(duì)酵母是無效的，因此為了防止大腸桿菌等原核生物對(duì)酵母 培養(yǎng)菌株污染，往往會(huì)在培養(yǎng)基中加入一些氨芐和卡那霉素的抗生素，來抑制細(xì)菌菌的污染和生長(zhǎng)。

PichiaPink Strain4酵母適宜的生長(zhǎng)溫度是24-30度，溫度超過32度對(duì)于細(xì)胞內(nèi)的蛋白表達(dá)是毀滅性災(zāi)難，可能導(dǎo)致細(xì)胞的死亡。

ADE2基因編碼磷酸核糖甲酰胺咪唑羧化酶基因，該基因能夠催化嘌呤核苷酸合成的第六步反應(yīng)。在釀酒酵母，畢赤酵母，或者其他酵母中，這個(gè)基因的突變或缺失能夠?qū)е锣堰是绑w在酵母細(xì)胞內(nèi)液泡內(nèi)的積累，使得細(xì)胞呈現(xiàn)粉紅色。

Pink4酵母菌株是ade2營(yíng)養(yǎng)缺陷型，細(xì)胞內(nèi)的ade2基因被缺失，部分ade2啟動(dòng)子也被缺失，所以菌株在缺乏腺嘌呤（adenine）的培養(yǎng)基中 無法生長(zhǎng)，而且在富培養(yǎng)基中生長(zhǎng)緩慢。將含有ade2基因的表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入該菌株中后，能夠使得菌株獲得在腺嘌呤缺乏的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而且菌株顏色由 ade2基因缺失時(shí)的粉紅色恢復(fù)為白色。從而間接的指明那些克隆菌株轉(zhuǎn)化質(zhì)粒成功。

配套載體是pPinkα-HC, pPink-HC 或者pPink-LC。

PichiaPink Strain4是pep4基因敲除酵母菌株。pep4基因編碼蛋白水解酶A，是細(xì)胞液泡內(nèi)的天冬氨酸蛋白酶，能夠自激活。由于蛋白水解酶A對(duì)于細(xì)胞內(nèi)液泡 的其他蛋白水解酶類也起到很重要的作用，所以pep4基因敲除的菌株，其蛋白水解酶B活力也下降了，而且細(xì)胞內(nèi)的羧肽酶Gama活性也喪失，這樣可以保護(hù) 表達(dá)產(chǎn)物免受降解，促進(jìn)表達(dá)量的提高。

PichiaPink Strain4是prb1基因敲除酵母菌株。prb1基因編碼蛋白水解酶B，是細(xì)胞液泡內(nèi)的絲氨酸蛋白酶，屬于枯草桿菌蛋白酶家族。細(xì)胞內(nèi)蛋白水解酶B的缺失可以保護(hù) 表達(dá)產(chǎn)物免受降解，促進(jìn)表達(dá)量的提高。

PichiaPink Strain4的蛋白水解酶A和B都被基因敲除了，因此是Pink系列菌株中蛋白酶活性最低的一個(gè)宿主菌，能夠有效抑制和避免蛋白質(zhì)的降解！

菌株類型：

畢赤酵母，彩虹酵母

培養(yǎng)基:

YPD培養(yǎng)基

生長(zhǎng)條件:

24-30 ℃,  有氧

基因型:

ade2, pep4, prb1

表型:

Ade2- pep4- prb1-

抗性:

氨芐和卡那

質(zhì)粒轉(zhuǎn)化條件:

電轉(zhuǎn)

應(yīng)用:

酵母蛋白表達(dá)，真核細(xì)胞蛋白表達(dá)