■ 基本信息
別名: | pET50b |
啟動(dòng)子: | T7 |
復(fù)制子: | pBR322 |
終止子: | T7 terminator |
質(zhì)粒分類: | 大腸桿菌載體；PET系列表達(dá)質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小: | 6733bp |
質(zhì)粒標(biāo)簽: | N-Nus, N-6×His, N-HRV 3C, C-S, C-Thrombin |
原核抗性: | Kan |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37℃，有氧，LB |
表達(dá)宿主: | BL21(DE3) |
誘導(dǎo)方式: | IPTG或乳糖及其類似物 |
5'測(cè)序引物: | T7:TAATACGACTCACTATAGGG |
3'測(cè)序引物: | T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 大腸桿菌 |
質(zhì)粒用途: | 蛋白表達(dá) |
片段類型: | ORF
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片段物種: | 空載體
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原核抗性: | Kan |
真核抗性: |
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熒光標(biāo)記: |
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■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介
pET50b載體攜帶有N端的Nus標(biāo)簽和His純化標(biāo)簽，緊跟著這些標(biāo)簽的有一個(gè)HRV3C蛋白酶切位點(diǎn)。這個(gè)HRV3C蛋白酶切位點(diǎn)能夠特異性的高效切割 “LEVLFQ↓GP”氨基酸序列，酶活力在低溫下很強(qiáng)。pET-50b(+)載體上還含有一個(gè)可選擇的C端Thrombin蛋白酶切位點(diǎn)和S標(biāo)簽序列。
載體的單一的多克隆位點(diǎn)見(jiàn)上面的環(huán)狀質(zhì)粒圖譜。注意：載體序列是以pBR322質(zhì)粒的編碼規(guī)矩進(jìn)行編碼的，所以T7蛋白表達(dá)區(qū)在質(zhì)粒圖譜上面是反向的。
T7 RNA聚合酶啟動(dòng)的克隆和表達(dá)區(qū)域在質(zhì)粒圖譜中也被標(biāo)注了出來(lái)。質(zhì)粒的F1復(fù)制子是被定向的，所以在T7噬菌體聚合酶的作用下，包含有蛋白編碼序列的病毒 粒子能夠產(chǎn)生，并啟動(dòng)蛋白表達(dá)，同時(shí)蛋白表達(dá)將被T7終止子序列的作用下終止蛋白翻譯。
質(zhì)粒只保證關(guān)鍵序列正確，不保證表達(dá)效果。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請(qǐng)下載：
ZK189pET-50b大腸表達(dá)質(zhì)粒.txt
