■ 基本信息
啟動子: | AOX1 |
復制子: | pBR322 |
質粒分類: | 酵母系列，畢赤酵母表達載體 |
質粒大小: | 9004bp |
原核抗性: | Amp |
真核抗性: | HIS4 |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37度 |
表達宿主: | 酵母細胞 |
5'測序引物: | AOX5:GACTGGTTCCAATTGACAAGC |
3'測序引物: | AOX3:GGCAAATGGCATTCTGACAT |
■ 質粒屬性
質粒宿主: | 酵母菌 |
質粒用途: | 蛋白表達 |
片段類型: |
|
片段物種: |
|
原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
|
熒光標記: |
|
■ 質粒簡介
PIC3.5K是一個鑒定多拷貝基因插入到畢赤酵母基因組中的載體。
1.pPIC3.5K載體大小為9004 bp。
2.在多克隆位點區(qū)域，擁有5個單一的限制性酶切位點：BamH I，Snab I，EcoR I，Avr II和Not I。
3.胞內表達。
4.載體構建時，需要包含一個ATG啟動子，同時需要加入Kozak序列。 (Cavener and Stuart, 1991; Kozak, 1987; Kozak, 1990)
5.畢赤酵母中使用HIS4基因篩選。
6.將基因插入GS115和KM71的AOX1中，需要使用Sac I線性化質粒(GS115產生的基因型為His+ Mut+，KM71酵母產生的基因型為His+ MutS)。
7.將基因插入GS115和KM71的HIS4中，需要使用Sal I線性化質粒(GS115產生的基因型為His+ Mut+，KM71酵母產生的基因型為His+ MutS)。
8.將基因插入GS115的AOX1基因中，也可以使用Bgl II限制酶線性化質粒，產生的酵母基因型為His+ MutS。
■ 質粒圖譜
■ 質粒序列
質粒序列請下載：
ZK920pPIC3.5K畢赤酵母質粒.txt
