■ 基本信息
別名: | pColdTF |
啟動子: | CSPA |
復制子: | pBR322 |
質粒分類: | 大腸系列質粒；大腸表達質粒；pCold系列質粒 |
質粒大小: | 5769bp |
質粒標簽: | N-His, N-Trigger factor, N-HRV 3C, N-Thrombin, N-Factor Xa |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37度 |
表達宿主: | BL21等大腸桿菌 |
培養(yǎng)條件: | 37℃，有氧，LB |
誘導方式: | IPTG或乳糖及其類似物 |
5'測序引物: | pCold-TF-F1（CCACTTTCAACGAGCTGATG） |
3'測序引物:
| pCold-R（GGCAGGGATCTTAGATTCTG） |
備注: | 冷啟動表達質粒 |
■ 質粒屬性
質粒宿主: | 大腸桿菌 |
質粒用途: | 蛋白表達 |
片段類型: | ORF
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片段物種: | 空載體
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原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
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熒光標記: |
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■ 質粒簡介
Takara的pCold TF載體是一種融合表達可溶性的標簽"觸發(fā)因子（Trigger Factor,TF）伴侶"的冷休克載體。"觸發(fā)因子"（48KD）是原核核糖體相關的分子伴侶蛋白（48 kDa），有利于新表達的多肽的共翻譯折疊。正因為它來源于大腸桿菌，保證了觸發(fā)因子能夠在大腸桿菌表達系統(tǒng)中高表達。 pCold TF載體由CSPA啟動子及其下游的序列組成，其下游序列主要包括包括5'非翻譯區(qū)（5'非編碼區(qū)），翻譯增強元件（TEE），His標簽序列，多克隆位點（MCS）。Lac操縱子插入在CSPA啟動子下游，以確保嚴格的表達調控。此外，HRV 3C蛋白酶，凝血酶，和Factor Xa識別位點位于“Trigger Factor”和多克隆位點（MCS）之間，以便表達的融合蛋白上將標簽去除。 大多數(shù)大腸桿菌菌株都可以可以作為本載體的表達宿主。pCold TF載體提供冷休克誘導的方法高水平表達目的蛋白，再加上觸發(fā)因子（伴侶）的表達來提高正確的蛋白質折疊，從而實現(xiàn)高效可溶性表達其他系統(tǒng)中難以對付的蛋白。
pColdTF質粒是利用冷休克基因CSPA啟動子設計高效率蛋白質表達載體。在E.COLI啟動子下游處，插入了lac操縱子，以便嚴格控制表達。此外，5’非翻譯區(qū)（5’UTR），翻譯增強元件（TEE）,His標簽序列，Xa因子切割位點和多克隆位點（MCS）位于CAPS啟動子的下游。當培養(yǎng)溫度切換到低溫時，大腸桿菌暫時停止生長，大部分的大腸桿菌蛋白質表達減少，但是一類稱為冷休克蛋白的蛋白質被特異性誘導表達。
■ 質粒圖譜
■ 質粒序列
質粒序列請下載：
ZK1592 pCold TF大腸表達質粒.txt
